第 496 号试验: 识别引起严重眼损伤的化学物质和不需要分类眼刺激或严重眼损伤的化学物质的体外大分子试验方法

Section4 健康影响 第496号试验指南 体外大分子检测方法鉴定化学品诱导严重 眼睛损伤和不需要眼睛分类的化学物质刺激或严重的眼睛损伤 2024年6月25日 经合组织测试指南 化学品 通过： 2019年10月24 日更新日期：2024年6月25日 经合组织化学品试验指南 鉴定化学品对眼睛潜在危害的体外大分子测试方法 INTRODUCTION 1.体外大分子测试方法眼部刺激（OI®）和OptiSafe眼部刺激测试™（OS）是无细胞生化体外测试方法，可用于识别不需要分类的化学物质（物质和混合物），以进行眼部刺激或严重的眼部损伤。此时，只有OI®可用于识别可能导致严重眼部损伤的化学物质。 2.本测试指南中描述的测试方法不能单独使用来代替体内Draize眼睛测试，以预测不同化学类别的严重眼睛损伤/眼睛刺激反应和机械方面的全部范围。因此，建议使用其他测试策略，例如TG467或492B中所述的测试策略，这些策略可以单独使用，以解决所需的潜在刺激范围。（分层）测试策略中的替代测试方法的战略组合，该策略结合了单个体外测试方法的优势，以解决所需的潜在刺激和/或化学类别范围，并在综合方法中对眼部毒性机理方面的现有知识测试和评估（IATA），可能能够取代联合国（UN）全球化学品统一分类和标签制度（GHS）（1）定义的危险分类的Draize眼检（1）（2）。Top-Dow测试策略方法被设计为当基于现有信息预期化学品具有高刺激潜力时使用,而自下而上方法被设计为当基于现有信息预期化学品不会引起足够的眼睛刺激而需要分类(1)(2)时使用。 3.大分子测试方法眼部刺激（OI®）是一种无细胞生化体外测试方法，可在某些情况下使用，并具有附录A第4至9段所述的特定限制，用于对眼睛进行危害分类和标记化学物质。尽管它不被认为是体内兔眼测试的独立替代方法，但建议将OI测试方法作为OECD指导文件（GD）263（1）中所述的Top-Dow测试策略方法的初始步骤，以积极识别引起严重眼睛损伤的化学物质，即Procedres.，将化学品归类为UNGHS类别1（3），无需进一步测试。还建议使用OI®测试方法来识别不需要根据UNGHS（UNGHSNoCategory）（3）定义对眼睛刺激或严重眼睛损伤进行分类的化学品，因此可用作底部向上测试策略方法（OECDGD263）（1）中的初始步骤。 4.高分子测试方法OptiSafe眼部刺激测试（OptiSafeEIT）是一种无细胞生化体外测试方法，可在某些情况下使用，并具有特定的 ©OECD（2024） 您可以根据http://www.oecd.org/termsandconditions/1上提供的条款和条件自由使用本材料 附录B第4段至第8段中所述的限制，以确定不需要对联合国全球统一制度(联合国全球统一制度无类别)(3)定义的眼睛刺激或严重眼睛损伤进行分类的化学品，因此可用作底部向上测试策略方法(OECDGD263)(1)中的初始步骤。 5.OI®和OS测试方法之间的差异包括1）测试化学品的表征，2）试剂制备，3）物理化学处理程序和4）结果解释。 6.一种不会导致严重眼睛损伤的化学物质(UNGHSCat。1)在OI测试方法中，也不像UNGHSNoCat。(i.Procedres.在OI®或OSTM测试方法中预测不会引起眼睛刺激/严重的眼睛损伤）将需要额外的信息和/或测试以建立明确的UNGHS分类。应在OECDGD263的背景下选择最合适的测试方法和使用本测试指南，其中自上而下和自下而上的测试方法代表了更广泛的测试和评估方法的一部分。严重眼睛损伤和眼睛刺激（1）。 7.本测试指南的目的是描述使用单独的体外大分子测试方法OI®（附录A）和OS（附录B）评估测试化学品对眼睛的潜在危害的程序。 LITERATURE 1.经合组织(2018年)。关于严重眼睛损伤和眼睛刺激的测试和评估的综合方法的指导文件。测试和评估系列 ，第263号。环境、健康和安全出版物，经济合作与发展组织，法国巴黎。可在: http://www.oecd.org/officialdocuments/publicdisplaydocumentpdf/?cote=ENV/JM/MONO(2017)15&doclanguage=en 2.斯科特·L，埃斯基·C，霍夫曼·S，阿德里亚恩斯·E，阿勒佩·N，布福·M，克罗蒂尔·R，法奇尼·D ，法勒·C，客人R，哈默尼克·K，哈贝尔·J，哈东·T，坎普·H，勒·瓦莱·B，梅洛尼·M，麦克纳米·P，奥斯本·R，帕佩尔提出了一种使用自下而上和自上而下方法减少和替代体内研究的眼部刺激测试策略。体外毒理学24,1-9。 3.联合国（UN）（2023年）。全球化学品统一分类和标签制度（GHS），第十次修订版，联合国纽约和日内瓦，2023年。可在以下网址获得：https://unece.org/sites/default/files/2023-07/GHS％20Rev10e.pdf 附录A:眼部刺激(OI®)鉴定方法i)引起严重眼部损伤的化学品和ii) 不需要对眼部刺激或严重眼部损伤进行分类的化学品 1.OI®测试方法包含由蛋白质、糖蛋白、碳水化合物、脂质和低分子量组分的混合物组成的大分子试剂,其在再水合时形成模拟透明角膜的高度有序结构的复杂大分子基质(1,2)。角膜不透明被描述为眼睛危险分类的最重要驱动因素(3)。它可能是由于测试化学物质可能通过e对角膜蛋白质和碳水化合物的高度组织化结构产生的破坏性影响。Procedre“凝固”描述为大分子(特别是蛋白质)的沉淀/变性或“皂化”描述为脂质的分解(4)。呈现眼部危险的测试化学品将通过促进蛋白质变性、解折叠和构象变化以及大分子基质组分的破坏和解聚而产生大分子试剂的浑浊。尽管大分子OI®测试方法最初是为了解决导致角膜混浊的眼部刺激物的破坏性影响而开发的,但验证研究表明,它也可以检测仅引起结膜损伤的刺激物,如在兔眼刺激性测试方法(OECDTG405)中所评估的。然而,作为无细胞生化测试系统,大分子测定没有解决眼毒性的细胞毒性和可逆性方面。因此，在决定分类时，需要根据GD263（5）中概述的现有数据和知识，考虑可能与测试化学品相关的所有可能的眼部毒性机制。 2.OI®测定法是第一个经过验证的大分子测试测定法，用于鉴定引起严重眼睛损伤的化学物质（i.Procedres.，UNGHS类别1）以及不需要根据UNGHS（UNGHSNoCategory）定义的针对眼睛刺激或严重眼睛损害进行分类的化学品。它被称为验证参考方法（VRM）测定，因为性能标准（6）可用于根据指导文件No.34(7)，并允许及时修订本测试指南，以便将其纳入。只有根据性能标准验证的测试方法经过OECD审查并包含在本测试指南中，才能保证数据相互接受（MAD）。 3.本测试指南中使用的术语“测试化学品”是指测试的内容，与体外大分子测试方法对物质和/ 或混合物测试的适用性无关。定义见附件1。 初步考虑、适用性和局限性 4.体外大分子测试方法眼刺激®在2009年至2012年之间进行了独立的验证研究（8），随后在2016年由EURL-ECVAM科学咨询委员会（ESAC）进行了独立的同行评审（9）。OECD专家组对ESAC推荐的补充数据进行了额外评估，涉及原材料的表征，用于进行测定的大分子基质粉末及其随时间的稳定性。在验证研究期间，共评估了89种测试化学品，包括13种混合物和76种物质。它们涵盖了广泛的功能组，分布为20个UNGHSCat。1，26UNGHS猫。2和43UNGHSNoCategory测试化学品，包括25种固体，57种液体和7种粘性测试化学品。本测试指南适用于10%溶液/分散体(v/v或w/v,视情况而定)pH为4的固体和液体化学品。pH值9.液体可能是粘稠的或非粘稠的。固体可能是可溶于水或不溶于水的，因为除非它们具有表面活性剂性质，否则它们是纯的。气体和气溶胶尚未在验证研究中进行评估 ，因此超出了适用范围。 5.从OI®早期版本或验证研究（10）的内部数据中确定了特定的局限性，这些化学品属于第6段（e。Procedre颜色强烈的化学品，引起盐析沉淀的化学品，高浓度的某些表面活性剂和高挥发性化学品），可能会干扰测试系统。干扰可包括抑制反映为特定OD的大分子基质的正常功能。405控制和测试化学品的读数（第19-20段），或被认为是结果报告和分析的组成部分的测试系统的具体观察（第22段），第19-20段概述的一套验收标准，并集成在系统软件中，允许继续识别这些限制。 6.OI®适用于物质和混合物。当考虑测试混合物时，难以测试的化学品(例如Procedre不稳定和聚合的物质，例如含有丙烯酸酯的物质），或者在本指南中描述的适用性范围内不清楚的测试化学品，应预先考虑此类测试的结果是否会产生科学上有意义的结果，或者对于预期的监管目的是可接受的。此外，重要的是要考虑所选体外方法提供的机理见解以及它如何涵盖测试化学品的机理。如OECDGD263(5)所述,如果合适,可以考虑使用基于不同作用机制的额外体外方法。 7.OI®测试方法的性能进行了评估，使用加权计算的个别预测的每一个合格的结果，在每个参与实验室的验证研究中使用的每种化学品，由欧洲推荐- ECVAM科学咨询委员会(ESAC)(9)1当用于识别引起严重眼睛损伤的化学物质时，我。Procedres.与根据UNGHS（8）（11）分类的体内兔眼测试方法数据相比，该体外大分子测试方法的总体准确性为75 ％（66.5/89），特异性为81％（55.8/69），敏感性为54％（10.7/20），与其他地方总结的体内兔眼测试方法数据相比（5）。这些结果包括UNGHSCat。1化学四甘醇二丙烯酸酯(CAS17831-71-9),其为不稳定的光敏聚合剂,鉴定为在其他采用的眼睛刺激测定中产生阴性结果。如果在性能分析中不考虑这种难以测试的化学物质，则体外大分子测试方法显示出76％的总体准确性（66.5/88），81％的特异性（55.8/69），56％的灵敏度（10.7/19），19％的假阳性率（13.1/69）和44％的假阴性率（8.3/19）。当用于此目的时，发现仅根据体内持续但非严重影响分类的测试化学品具有较高的预测不足风险（7个中的5个）。然而，在这种情况下，假阴性率(i。Procedres.体内UNGHS类别1通过测试被确定为不是UNGHS类别1）并不重要，因为所有阴性的测试化学品随后都将通过其他经过充分验证的体外测试进行测试，或者作为最后的选择。根据OECDGD263（5），根据监管要求，采用证据权重方法的顺序测试策略。 8.当用于识别不需要对眼睛刺激和严重眼睛损伤进行分类的化学品时，发现OI®测试方法的总体准确性为75％（67.0/89），灵敏度为91％（41.7/46），与根据联合国全球统一制度分类的体内兔眼测试方法数据相比，基于加权方法计算的特异性为59％（25.3/43） （8）（11）体内兔眼测试具有其自身的不确定性，如其他地方（5）所述。然而，这些结果包括联合国全球统一制度委员会。在图1中,化学四甘醇二丙烯酸酯(CAS17831-71-9)是一种不稳定的光敏聚合剂,被鉴定为在其他采用的眼睛刺激测定中产生阴性结果。如果在性能分析中不考虑这种难以测试的二丙烯酸酯化学品，则体外大分子测试方法显示出76％的总体准确性（67.0/88），59％的特异性（ 25.3/43），与根据UNGHS（8）（11）分类的体内兔眼测试方法数据相比，灵敏度为93％（41.7 /45），假阳性率为41％（17.7/43）和假阴性率为7％（3.3/45）。然而，在这种情况下的假阳性率（UNGHSNoCategoryidetifiedasreqiredclasses）并不重要，因为所有测试化学品都将随后用其他经过充分验证的体外测试进行测试，或作为兔子的最后选择，根据监管要求，根据OECDGD263（5），使用证据权重方法中的顺序测试策略。还应