评估拟议的类似或改进的体外表皮致敏试验（EpiSensA）测试方法的性能标准

核心观点

本研报提出了用于评估拟开发的类似或修改过的体外表皮致敏试验（EpiSensA）测试方法的性能标准（PS）。EpiSensA是一种体外方法，用于识别化学物质的皮肤致敏潜力，并被纳入测试指南442D中。

关键数据

• EpiSensA测试方法：通过定量测量重建人表皮（RhE）模型中与角质形成细胞活化相关的四个标记基因（ATF3、GCLM、DNAJB4和IL-8）的表达变化，评估化学物质在6小时暴露后的皮肤致敏潜力。
• RhE模型要求：非转化的人角质形成细胞用于重建上皮，应具有多层活体上皮细胞和功能性的角质层，以抵抗细胞毒性基准化学物质（如SLS）的快速渗透。
• 质量控制：RhE模型应符合预定义的接受标准，包括屏障功能（SLS IC50）和形态学检查。
• 测试程序：包括浓度测定研究和主要研究（基因表达分析）两个步骤。
• 浓度测定研究：确定用于主要研究的化学物质浓度，以在≥80%细胞活力的浓度下进行测试。
• 主要研究：使用RT-qPCR分析标记基因和内参基因的表达水平。
• 细胞毒性评估：使用LDH测定法或MTT测定法或ATP测定法评估细胞毒性。
• 参考物质：使用20种参考物质（14种皮肤致敏剂和6种非致敏剂）评估测试方法的预测能力和实验室间重现性。
• 重现性：实验室间重现性（BLR）应≥80.0%，实验室内部重现性（WLR）应≥80.0%。
• 预测能力：准确性、敏感性和特异性应分别≥85.0%、≥85.0%和≥65.0%。

研究结论

• 拟开发的类似或修改过的EpiSensA测试方法应满足本研报提出的性能标准，才能证明其具有足够的可靠性和相关性，并可用于皮肤致敏潜力的评估。
• 所有参考物质应在至少三个实验室中测试，以评估测试方法的预测能力和实验室间重现性。
• 测试方法的准确性、敏感性和特异性应与EpiSensA测试方法相当或更好。