食品中益生菌的评价指南

ICMR-DBT 食品中益生菌的评价指南 印度医学研究理事会 (卫生与家庭福利部卫生研究部) 生物技术系（科学技术部）新德里 1 2011 ©印度医学研究理事会（ICMR）2011 2 a. CONTENTS 第六工作队的组成 1. 2. 2.1范围2 2.2益生菌的定义3 2.3属、种和菌株鉴定3 2.4筛选潜在益生菌菌株的体外试验3 2.5动物模型的体内安全性研究4 2.6动物模型体内药效研究4 2.7人用益生菌的安全性评价4 2.8对人体功效研究的评估5 2.9益生菌菌株的有效剂量/菌株5 2.10标签要求5 2.11制造和处理程序6 3. 4. 3 a. MaharajKishanBhan博士印度政府秘书 科学技术部生物技术部MD,DSc,FNA,FASc,FAMS 前文[ 益生菌是帮助维持肠道微生物自然平衡的细菌。正常人的消化道含有约400种益生菌，可减少有害细菌的生长并促进健康的消化系统。对益生菌疗法的益处的实验表明，益生菌具有一系列潜在的有益药用用途。乳杆菌的分子生物学和基因组学的最新研究集中在与免疫系统的相互作用，抗癌潜力以及在抗生素相关的腹泻，旅行者腹泻，儿科腹泻，炎症性肠病和肠易激综合征的情况下作为生物治疗剂的潜力。 食品贸易的日益全球化导致印度成为益生菌产品的快速新兴市场。随着这些产品的可得性呈指数级增长以及关于有益健康影响的多种声明,需要建立足够的保障措施以保护消费者免受任何不利影响,确保商业产品的标准化及其功效。 本ICMR-DBT指南全面解决了有关安全性，有效性和可靠性以及在印度销售的益生菌产品的标签的各种问题。 我希望科学界，监管机构和广大公众将受益于这些指南。 -sd- (M.K.Bhan) 4 a. 博士VishwaMohanKatoch政府秘书 健康与家庭福利部印度医学研究理事会总干事 PREFACE 益生菌的概念在20世纪初被引入，然而近年来随着新兴的科学证据表明它们在消化和免疫功能中的作用，它们变得越来越重要。 在过去的十年中，在印度市场上越来越多的益生菌产品涌入。但是，没有系统的方法来评估食品中的益生菌以确保其安全性和有效性。 作为印度生物医学研究的制定，协调和促进的最高机构，印度医学研究理事会（ICMR）与生物技术系（DBT）一起主动制定了印度食品中益生菌评估指南。成立了一个工作队，以审查世界不同地区现有的各种准则，并根据当地情况审议相关问题。本文件中制定和呈现的指南定义了被称为“益生菌”的产品/菌株所需的一组参数。这些包括染色剂的鉴定，益生菌特性的体外筛选，建立安全性的动物研究以及建立功效的体内动物和人类研究。这些还包括用菌株规格、保质期结束时的活菌数、储存条件等标记益生菌产品的要求,这将防止误导消费者。 这些指南是为科学目的而制定的，主要目的是指导监管机构评估我国的益生菌产品。我希望这些指南也能激发对印度发展这一领域感兴趣的科学家的思考。 -sd- (V.MKatoch) 5 a. ACKNOWLEDGEMENTS 我们非常感谢参与制定准则的所有人提供的帮助。 我们感谢教授。N.K.Gagly，“食品中益生菌评估指南”工作组主席，印度医学研究委员会前总干事，以确定食品中益生菌指南的必要性和重要性。工作队举行了三次会议，以制定和彻底讨论准则的各个方面。此外，还举行了核心小组和后续会议，以讨论该文件的某些技术细节。我们感谢所有工作队成员在编写指南和完善手稿方面的贡献。 我们还感谢参加科学审议的非政府组织/行业代表的投入，以及在ICMR网站上发布准则草案后从其他方面收到的建议。 还承认ICMR和DBT秘书处为汇集现有信息和协调工作队活动所做的努力。 -sd- (K.Satyanarayana博士) 生殖 健康和营养司司长出版和信息ICMRHqrs，新德 里 6 a. 关于“食品中益生菌评估指南”的任务组 主席 N.K.Ganguly博士 JIPMER主席，Puducherry前总干事， ICMR，新德里 前主管，PGIMER，昌迪加尔 成员 S.K.Bhattacharya博士前地址。新德里ICMR总干事 B.Sesikeran博士 Director 海得拉巴国家营养研究所 G.B.Nair博士 导演, 国家霍乱和肠道疾病研究所加尔各答 Dr.B.S.Ramakrishna 教授和负责人 Vellore基督教医学院临床胃肠病学和肝病学 V.K.Batish博士 美国国家乳品研究所微生物学系前系主任 Karnal A.S.Kanagasabapathy博士 顾问生物化学家KamNeni 医院安得拉邦 VasanthaMuthuswamy博士前负责人（RHN和BMS）ICMRHqrs，新德里 S.C.Kathuria博士 印度食品安全与标准局副助理总干事(PFA)新德里 H.P.S.Sachdev博士儿科高级顾问 SitaramBhartiya科学研究所，新德里 印度医学研究委员会，新德里 Dr.V.M.Katoch ICMRDHR&DG秘书 K.Satyanarayana博士 HeadRHNandP&I G.S.Toteja博士 科学家“F” 成员秘书和召集人 Dr.ManjuRahi 科学家“C” Ms.SprihaRao 研究学者 协调单位 新德里生物技术部 M.K.Bhan博士 生物技术部秘书 RajeshKapur博士 顾问（食品与营养） 7 (vi) 缩写 BMS：基础医学 CFU:殖民地形成单位 DBT：生物技术部门DHR：卫生研究部门DNA：脱氧核糖核酸 粮农组织：粮食及农业组织GCP：良好临床实践 GMO：转基因生物GMP：良好生产规范GRAS：公认安全ICMR：印度医学研究委员会HACCP：危害分析和关键控制点ICPS：原核生物系统学国际委员会 JIPMER：Jawaharlal研究生医学教育与研究研究所PCR：聚合酶链反应 PFGE：脉冲场凝胶电泳 PGIMER：医学教育与研究研究生院PI：出版与信息 RNA:核糖核酸 RHN：生殖健康和营养标准操作程序：标准操作程序 8 (vii) ICMR-DBT食品益生菌评价指南 1.INTRODUCTION 益生菌的概念（意思是“为生命”）是由ElieMetschioff（1）在20世纪初提出的，但是直到最近才在全球功能和健康食品市场取得了长足的进步。印度也正在迅速成为食品中益生菌的潜在市场。全球益生菌市场在2008年创造了159亿美元，预计到2014年将达到326亿美元，2009 年至2014年的复合年增长率为12.6%。另一方面，印度的益生菌产品行业估计约为2060万卢 比，预计到2015年的年增长率为22.6%。 已提出益生菌,尤其是乳杆菌和双歧杆菌与减轻乳糖不耐受(4);预防和治疗病毒、细菌和抗生素或放射疗法引起的腹泻(5,6.7);免疫调节(8);抗诱变(9)和抗癌作用(10);甚至降低血液胆固醇(11) 。然而，与益生菌相关的乐观情绪被怀疑主义所抵消，因为市场上的许多“益生菌”产品的含量不可靠且未经临床证实（12-15）。 此外,乳杆菌和双歧杆菌很少与人临床感染相关,这可能是机会性感染的结果,尤其是在免疫受损的个体中(16-17)。几十年来使用的许多益生菌菌株已被验证其安全性和功效，因此使用安全（ 18,19）。任何用作益生菌的新菌株都应进行安全性和有效性评估。 然而，肠球菌正在成为医院感染的重要原因，分离株越来越对万古霉素耐药(20)。 影响，尽管益生菌很少见，但有i)全身性感染ii)有害的代谢活动iii)易感个体的过度免疫刺激和 iv)基因转移(21)因此,没有致病性和感染性是益生菌安全性的必要先决条件(22)。 关于食品中益生菌的国际指南(23,24)广泛规定了确定食品中益生菌产品的安全性和评估健康要求所需的测试类型。此类测试基于当前对该主题的理解。 益生菌的监管机制因国家而异，甚至在一个国家(23,25)。 在印度，没有针对益生菌食品的监管指南。在没有任何此类标准和准则的情况下，虚假产品的销售空间很大。因此，这些产品在被标记为“益生菌产品”之前必须满足一些基本的先决条件。因此 ，需要一种整体方法来制定指南和法规，以评估印度益生菌的安全性和有效性，这些指南和法规应符合当前的国际标准。 鉴于上述情况，ICMR成立了一个工作队，由来自不同领域的专家组成，以制定评估印度食品中益生菌的指南。工作队考虑了世界不同地区可用的准则（20，26-31），并审议了要涵盖的各个方面（32-36）。本文件中规定的指导方针是为了在印度销售被称为“益生菌”的菌株或食品而遵循的。 2.益生菌产品指南和要求 2.1.范围:该指南涉及益生菌在食品中的使用，并提供了益生菌菌株的安全性和有效性评估以及健康声明和益生菌产品标签的要求。 注意：这些指南不适用于益生菌，根据定义，益生菌将属于药物，不用于食品或转基因微生物（ GMO）的有益微生物。 2.2益生菌的定义：益生菌是“活的微生物,当以足够的量施用时赋予宿主健康益处”(FAO/WHO,2002)(20)。 2.3属、种、菌种鉴定：益生菌的作用是菌株特异性的。菌株识别对于将菌株与特定的健康影响联系起来以及进行准确的监测和流行病学研究非常重要。应使用经过验证的标准方法进行表型和基因型测试。根据国际原核生物系统学委员会（ICPS），细菌的命名必须符合当前科学认可的名称（可在http：//www上获得。-icsp。org/). 目前用于鉴定的分子技术包括基于PCR的技术、16SrRNA测序和DNA指纹印刷技术,如核糖分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)。 建议在印度使用的益生菌菌株应存放在国际公认的培养物收集/存储库中。 2.4筛选潜在益生菌菌株的体外测试：建议使用标准方法进行以下体外测试*，以筛选推定的益生菌菌株： 2.4.1耐胃酸。 2.4.2耐胆汁酸。 2.4.3抗潜在致病菌的抗菌活性（酸和细菌素生产） *对粘液和/或人类上皮细胞和细胞系的粘附在过去已被用于筛选候选益生菌。委员会对此进行了辩论，并得出结论认为益生菌不粘附。因此，这不应该被用作强制性标准，也不应该声称一种菌株在益生菌属性和功能方面优于另一种菌株。 2.4.4减少病原体对表面粘附的能力 2.4.5胆盐水解酶活性 这些测试基于它们在体外条件下模拟的不利的肠道环境。基于这些测试评估为益生菌的培养物应该在适当的动物模型中进行临床前验证，然后在人类受试者中进行临床试验。 2.5动物模型的体内安全性研究:应对所有潜在菌株进行摄入极大量益生菌的急性，亚急性和慢性毒性评估。对于已确定使用的菌株，可能没有必要进行此类评估。 2.6动物模型体内药效研究:为了证实体外效果，必须在人体试验之前首先使用适当的，经过验证的动物模型。 2.7人用益生菌的安全性评价：认识到确保安全的重要性，即使在公认为安全（GRAS）** 的细菌组中，益生菌菌株至少需要通过以下测试进行表征： 2.7.1抗生素抗性模式的确定应确定任何给定的益生菌菌株在可转移的抗生素抗性方面没有显著风险。 2.7.2不良副作用的评估。 2.7.3如果所评估的菌株属于已知哺乳动物毒素生产者或具有溶血潜力的物种,则必须分别测试其毒素产生和溶血活性。 **由美国食品和药物管理局（FDA）定义 在免疫受损的个体中评估益生菌菌株缺乏感染性将是额外的措施。 2.8对人体疗效研究的评价：益生菌功效研究的主要结果应在人体试验中证明具有类似的益处，例如在统计学和临床上显着改善病情，症状，体征，健康或生活质量，降低疾病风险或更长的时间下一次发生或从疾病中更快恢复。每个参数都应证明与测试的益生菌相关。 在食物中提供的益生菌可能不会在3期研究（有效性）中进行测试，除非产品做出特定的健康声明，其中必须产生需要进行3期研究的所需证据。 如果益生菌食品在国外有长期安全使用的记录，则可以对有关数据进行审查，并认为其足以在国内销售。但是，