493号论文：直接研究体外抗雌激素受体重组人（hrER）对雌激素受体亲和力物质的保护作用

核心观点

本指南描述了使用重组人雌激素受体 (hrERα) 进行的体外雌激素受体结合试验 (ERBA) 的方法学，旨在检测与雌激素受体具有结合亲和力的物质。指南包含两种结构上和功能上相似的方法，即 Freyberger-Wilson (FW) 法和 Chemical Evaluation and Research Institute (CERI) 法，并促进开发新的类似或修改后的方法。

方法学

ERBA 试验基于配体与受体直接相互作用的原则，通过测量放射性标记的配体 ([3H]-17β-estradiol) 在存在或不存在测试化合物的情况下与 hrERα 的结合能力来评估测试化合物的雌激素活性。试验包括两个主要部分：

• 饱和结合试验：用于确认受体的特异性和活性，并确定受体-配体相互作用的参数，如结合常数 (Kd) 和最大结合位点数 (Bmax)。
• 竞争结合试验：用于评估测试化合物与 hrERα 结合的能力，通过与 [3H]-17β-estradiol 竞争结合位点来测定测试化合物的结合亲和力。

数据分析

试验数据通过非线性回归分析进行拟合，通常使用 Scatchard 模型或 Hill 模型。根据测试化合物与 hrERα 的结合能力，将其分类为配体、非配体或可疑物质。

试验验证

指南中包含两种完全验证的方法，即 FW 法和 CERI 法，并提供了性能标准，以促进类似方法的开发和验证。任何新方法都必须经过审查和批准，以确保其性能与已验证的方法相当。

试验局限性

ERBA 试验主要用于检测与 ERα 结合的物质，并不能直接推断其在体内的效应。此外，试验不区分激动剂和拮抗剂，也不评估与结合相关的基因转录或生理变化。