《OECD测试化学物指南488号：转基因鼠体细胞和生殖细胞基因突变检测》
概览与更新
- 时间与版本：该指南于2022年6月30日修订并采用，是对2011年原始版本的更新。
- 主要修改：包括动物开始治疗时的年龄范围调整、精索干细胞成熟时间和收集精子的生殖器官部分的更新，以及对雄性生殖细胞基因突变分析推荐程序的修订。
基本原理与方法
- 实验设计：使用转基因小鼠和大鼠，这些动物体内含有多个集成染色体的质粒或噬菌体穿梭载体，包含用于检测由测试化学物质诱导的体内DNA损伤的报告基因。
- 检测流程：通过从实验动物的组织中提取基因组DNA，使用λ噬菌体或质粒穿梭载体进行体外处理（如包装λ病毒或电穿孔质粒以恢复穿梭载体），并在合适的条件下在细菌宿主中检测突变。
- 分析：主要关注在任何组织中检测基因突变，而不受特定组织的限制，这有助于避免研究内源基因突变时存在的局限性。
应用与相关性
- 遗传毒性测试概述：提供了一篇全面的遗传毒性测试概述，以及最近对测试指南的更改。
- 实验动物选择：推荐使用转基因小鼠和大鼠进行基因突变检测，这些动物能够广泛应用于任何组织的基因突变检测。
- 国际认可：国际工作坊在基因毒性测试中的基因突变检测使用和实施协议得到了认可，并建议了支持此协议的进一步分析。
实施注意事项
- 混合物测试：考虑混合物是否能为预期的监管目的提供足够的结果，特别是当有具体的监管要求时。
- 实验设计：在实施基因突变测试时，考虑与重复剂量毒性试验（TG 407）使用相同的处理方案，并考虑将基因突变测试与其他基因毒性终点（如微核和Pig-a突变）结合进行。
- 组织收集：建议在动物被人道地杀死后立即收集组织并快速冷冻，然后在-70°C±5°C的温度下保存，直到从感兴趣组织中提取基因组DNA并纯化。
结论
修订后的《OECD测试化学物指南488号》整合了体细胞和生殖细胞基因突变的分析，并与最近修订的OECD基因毒性测试指南协调一致。该指南强调了转基因鼠基因突变测试在检测因DNA损伤导致的组织内基因突变方面的应用，提供了广泛的实验设计选项和实施建议，以适应不同研究需求和监管要求。
