NIST 2025 快速微生物检测方法研讨会报告总结
研讨会概况
美国国家标准与技术研究院（NIST）于2025年4月8日举办了第五届快速微生物检测方法（RMTM）研讨会，旨在讨论快速无菌检测技术的最新进展，并更新NIST RMTM联盟的工作进展。研讨会以线上形式进行，吸引了来自工业、学术界、政府机构以及合同测试实验室等领域的308名注册人员，其中36%来自工业界。
技术进展
- 纳米孔长读长测序在细胞治疗产品无菌检测中的应用：新加坡-麻省理工学院联盟（SMART）的James Strutt介绍了纳米孔测序在非靶向微生物检测中的应用，包括初步了解“组库”（kitome）的基线特征。该技术能够实时、无偏检测微生物，检测限满足监管要求，且相比短读长测序，长读长测序提供更易组装的基因组、更完整的覆盖范围和结构变异检测，可在16小时内使用小于1毫升的样品检测到需氧和厌氧物种，检测限为10 CFU。
- NomadX平台通过拉曼光谱在复杂基质中检测病原体：NomadX的Heidi Leonard介绍了利用快速样品浓缩和富集技术，通过拉曼光谱检测复杂基质中的病原体。其新型产品“浓缩移液器”可高效浓缩样品，随后采用表面增强拉曼光谱（SERS）检测和鉴定污染物。该方法在约1小时内即可检测到目标，但仍面临背景基质干扰、优化树突形态、确保基材货架期和规模化等挑战。
NIST RMTM联盟工作组进展
- 工作组1（WG1）：参考材料：NIST的Nancy Lin和Kirsten Parratt介绍了WG1致力于支持现有参考材料的扩展认证，以弥合传统无菌检测方法与新型快速方法（如分子技术）之间的差距。目前大多数微生物细胞参考材料仅认证菌落形成单位（CFU），而无法准确反映与分子方法更相关的总基因组拷贝数或总细胞计数。研究评估了多种商业参考材料的细胞计数和基因组拷贝数表征方法，建议根据材料特性制定优化方案，以实现额外量化。
- 工作组3（WG3）：实验室间研究：Jason Kralj和Stephanie Servetas介绍了WG3在收集RMTM数据方面的进展。两个实验室间研究已完成：
- 研究1：验证了市售材料是否适用于RMTM的资格或验证，结果表明市售大肠杆菌材料适合作为qPCR对照。
- 研究2：调查了使用模拟CAR-T产品样品的多种无菌检测方法，包括BacT/ALERT、Bactec、Celsis、微量热法、USP <71>、RNAseq、qPCR和单核细胞活性等，结果显示许多基于活力的方法与USP <71>表现相当，RNAseq在分子方法中表现良好，但qPCR和MAT方法受背景DNA和LPS污染影响。
- 工作组2（WG2）：方法学：Scott Jackson和Tyler Laird介绍了WG2开发支持基于下一代测序（NGS）的无菌检测方法工具的努力。关键成果包括：
- 开发了ENSure数据库和生物信息学管道，包含 curated 的无菌相关物种基因组，并计划进行实验室间研究以评估其性能和可重复性。
- 探索微生物信号富集方法，包括扩增子测序，并强调目标富集和宿主清除方法的重要性。
未来方向
研讨会讨论了联盟的未来方向，鉴于原五年合作协议即将到期，考虑延长合作时间以完成 ongoing 工作，或将部分工作转移至其他RMTM利益相关者群体。此外，调查结果显示对RMTM的需求仍然普遍，分子方法仍被视为最有希望的采用方法，快速方法的采用和兴趣有所增加，但对所需结果时间的预期也相应增长（8小时至48小时更现实），对检测活力的需求也增加。
